#JBCM 18

Título: Construcción de fusiones traduccionales para el estudio de localización de proteínas de la matriz extracelular de biofilms de Bacillus

Nombre: Rafael  Villar Moreno - e-mail: rafael.villar.moreno@gmail.com - Twitter:

Grupo: Estudiante máster / Microbiología

Director/a: Diego Romero Hinojosa. Dpto. Microbiología

Tutor/a:

 

Resumen:

Las bacterias del género Bacillus se caracterizan por ser Gram positivas, esporulantes y formadoras de biofilms. B. subtilis, es  una especie modelo en estudios de regulación génica, y B. cereus, es importante por producir intoxicaciones por consumo de alimentos contaminados. El biofilm es una estructura tridimensional y dinámica, compuesta por bacterias y matriz extracelular, formada mayoritariamente por exopolisacáridos y proteínas. Unas de las proteínas claves son proteínas estructurales, algunas formadoras de fibras amiloides. En B. subtilis se conoce la proteína TasA, de la que existen dos ortólogos en B. cereus (TasA y CalY). Dada su relevancia en el comportamiento multicelular de Bacillus, se planteó la construcción de fusiones traduccionales que permitiesen llevar a cabo estudios de localización celular en ambas especies. La inestabilidad de fusiones de proteínas extracelulares a proteínas fluorescentes nos llevó a plantear el uso de SNAP-Tag®/CLIP-Tag®, herramienta que permite el marcaje de proteínas mediante fusión a un tag que al reaccionar con un sustrato emite fluorescencia cuya longitud de onda depende del sustrato añadido. Algunas ventajas de este tipo de marcajes son: 1) elección del momento de activación/apagado, 2) múltiples fluorocromos, un solo tag, 3) fluorescencia estable in vitro. Con este abordaje se pretende poder llevar a cabo los estudios de localización de proteínas estructurales de la MEC de biofilms en B. subtilis y B. cereus, así como futuros estudios de cinética de polimerización de las proteínas in vivo e in vitro o de translocación proteica.

 

Referencias:

- Branda, S. et. al. A major protein component of the Bacillus subtilis biofilm matrix. Molecular Microbiology, 59(4), 1229–1238 (2006).
- Caro-Astorga, J. et al. A genomic region involved in the formation of adhesin fibers in Bacillus cereus biofilms. Frontiers in Microbiology, 5(DEC), 1–11 (2015).
- Flemming, H. et al. The biofilm matrix. Nature Reviews.
Microbiology, 8(9), 623–33 (2010).

Financiación: BacBio ERC637971